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檢測(cè)產(chǎn)品展示

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ELISA試劑盒

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玉米赤霉烯酮(Ⅰ型)

型號(hào)/規(guī)格:ZYD-YMCMXT(Ⅰ型)
檢測(cè)項(xiàng)目:玉米赤霉烯酮(Ⅰ型)
產(chǎn)品用途:可定性、定量檢測(cè)谷類、啤酒及飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮?dú)埩袅俊?br /> 產(chǎn)品關(guān)鍵詞:玉米赤霉烯酮(Ⅰ型)

產(chǎn)品詳情

玉米赤霉烯酮(Ⅰ型)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

【概要】

玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素,是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物,具有雌激素樣作用,具有較強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用,可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥,導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn),對(duì)家禽、豬、牛和羊的影響較大,給畜牧業(yè)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。


【適用范圍】

可定性、定量檢測(cè)谷類、啤酒及飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮?dú)埩袅俊?


【試驗(yàn)原理】

本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA,在微孔板上預(yù)包被玉米赤霉烯酮抗原,加入樣本/玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液及辣根過氧化物酶標(biāo)記的玉米赤霉烯酮抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的玉米赤霉烯酮與預(yù)包被在微孔板上的玉米赤霉烯酮抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的玉米赤霉烯酮抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物玉米赤霉烯酮抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得出相應(yīng)殘留物玉米赤霉烯酮的含量。


【試劑盒靈敏度】

   試劑盒靈敏度:0.2ppb


【交叉反應(yīng)率】

   結(jié)構(gòu)類似物                                                               交叉反應(yīng)率

  玉米赤霉烯酮   ……………………………………………………………  100%

  α-玉米赤霉醇  ……………………………………………………………   75%

  β-玉米赤霉醇   ……………………………………………………………   61%

  α-玉米赤霉烯醇  …………………………………………………………  103%

  β-玉米赤霉烯醇  ……………………………………………………………  83%

  玉米赤霉酮   …………………………………………………………………  75%


【試劑盒組成】

1. 96孔板×1塊

2. 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶:(2ml/瓶)

0ppb, 0.2ppb, 0.6ppb, 1.8ppb, 5.4ppb, 16.2ppb

3. 酶標(biāo)物 1瓶  ………………………………………… 7ml

4. 顯色液1瓶  ………………………………………… 12ml

5. 終止液1瓶  ………………………………………… 10ml

6. 濃縮洗滌液 (10×)1瓶 ……………………… 50ml

7. 濃縮樣品稀釋液(10×) 1瓶………………… 20ml


【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備:

┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm

┅┅振蕩器

┅┅粉碎機(jī)

┅┅離心機(jī)

┅┅天平:感量0.01g

┅┅微量移液器:?jiǎn)蔚?20μl~200μl、200μl~1000μl、多道 300μl

試劑:

-----甲醇

----去離子水(或蒸餾水)


【試劑配制】

1. 樣品稀釋液:將濃縮樣品稀釋液用去離子水按1:9體積比進(jìn)行稀釋(1份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水)。

2. 洗滌工作液:將濃縮洗滌液用去離子水按1:9體積比進(jìn)行稀釋(1份濃縮洗滌液+9份去離子水)。

3. 50%甲醇:取無水甲醇,用去離子水以1:1體積比例稀釋(1份無水甲醇+1份水)。

4. 40%甲醇:取無水甲醇,用去離子水以4:6體積比例稀釋(4份無水甲醇+6份水)。


【樣本前處理步驟】

一、 谷物(稀釋倍數(shù):10)

1. 取1g粉碎樣品,加入4ml 50%甲醇;

2. 劇烈振蕩5min;

3. 4000g離心5min;

4. 取上清液400μl,加入600μl樣本稀釋液,混勻;

5. 取稀釋后液體待測(cè)。


二、啤酒(稀釋倍數(shù):10)

1. 取待測(cè)啤酒,除凈氣體(60℃水浴或振蕩去除);

2. 取1ml啤酒,加入4ml40%甲醇;

3. 劇烈振蕩5min;

4. 取上述液體500μl,加入樣本稀釋液500μl,混勻;

5. 取稀釋后液體待測(cè)。


三、飼料(稀釋倍數(shù):200)

1. 取0.5g粉碎樣本,加入20ml無水甲醇;

2. 充分振蕩5min;

3. 5000rpm離心5min;

4. 取上清液100μl加入樣本稀釋液400μl混勻;

5. 取稀釋后液體待測(cè)。


【檢測(cè)步驟】

一、 測(cè)定前須知:

1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫(20~25℃)。

2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃,干燥環(huán)境保存有利于保持試劑穩(wěn)定性。

3. ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA操作中的要點(diǎn)。

4. 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。


二、操作步驟:

1. 將所需試劑及微孔板取出,放置室溫(20~25℃)30min以上,液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出所需數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板與干燥劑一起重新真空密封,放置于2~8℃。不可冷凍。

3. 洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl到對(duì)應(yīng)的微孔中,加入酶標(biāo)物50μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應(yīng)15min。

6. 小心揭開蓋板膜,用洗滌工作液充分洗滌,300μl/孔,洗板5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干。

7. 加入顯色液100μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應(yīng)15min。

8. 加終止液50μl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)酶標(biāo)儀于450nm處讀取每孔OD值。


【結(jié)果判定】

1. 百分吸光率的計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光率(%)= B/B0 ×100%

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0(ppb)標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值


2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋

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